油脂在高温下连续重复使用会发生一系列的降解反应和氧化反应,形成各种各样的降解产物和氧化产物,一般这些降解产物和氧化产物的极性要比油脂的主要成分未发生任何反应的甘油三酯的极性要强,所以一般统称其为油脂的极性组分。油脂的极性组分不仅对油脂本身的品质、油炸食品的风味和营养价值均会产生不良的影响,而且在油炸食品过程中,极性化合物能够附着在食品上,食用极性化合物会对人体造成许多的不良反应。因此,极性组分的含量是评价煎炸过程中,食用油脂安全性的重要指标14。
柱层析硅胶法是常用的检测食用油脂中极性组分含量的方法之一。现行的相关国内外检测技术标准都采用该方法检测食用油脂的极性组分含量。该技术的关键就是要掌握优的非极性组分洗脱剂的使用体积,从而实现油脂极性组分和非极性组分的充分分离。本研究通过对非极性组分洗脱全过程中洗脱物的部分收集研究,以及柱层析硅胶分离制备的煎炸油极性组分和非极性组分的薄层色谱(TLC)的验证,优化并确立了柱层析硅胶法分离煎炸油极性组分和非极性组分佳的有机溶剂洗脱体积,后对优化的分离条件进行了回收率的验证。
1材料与方法1.1材料与试剂1.1.1试剂和材料乙醚、石油醚(沸程30~60)、丙酮、三氯甲烷、冰醋酸、95%乙醇、磷钼酸(均为分析纯)、海沙(化学纯):国药集团上海化学试剂有限公司;硅胶60:Merk7734,默克化工技术(上海)有限公司;煎炸油脂样品:由实验室用市售一级大豆油自行煎炸使用后制备。1.1.2仪器和设备250mL圆烧瓶或平底烧瓶,带玻璃磨口;玻璃层析柱:内径21mm,长450mm,下部有砂芯筛板和四氟乙烯活塞阀门;玻璃搅棒;25mL量筒;旋转蒸发仪:上海亚荣生化仪器厂;SartoriusBS224A型电子天平(万分之一):赛多利斯公司;DZF6020型真空干燥箱:上海浦东荣丰科学仪器有限公司。
1.2试验方法1.2.1样品溶液的制备煎炸油脂样品先用滤纸过滤除去不溶性杂质,然后精确称取2.5g样品于50mL容量瓶中,加入洗脱剂(石油醚乙醚=8713,V/V)溶解并定容。1.2.2装柱用一个烧杯,准确称取25g的硅胶60,再倒入80mL的洗脱剂,通过搅拌使硅胶悬浮于洗脱剂内。然后立即通过一个漏斗将此硅胶悬浮液倒入玻璃层析柱内(此时关闭层析柱下端的活塞阀门),确保硅胶全部转移入玻璃层析柱。打开玻璃层析柱下端的活塞阀门,放出层析柱内的洗脱剂,直到层析柱内洗脱剂的液面比沉降的硅胶的顶端高10cm,再通过漏斗向玻璃层析柱内加入4g海沙,然后再放出层析柱内的洗脱剂,直到洗脱剂的液面低于海沙沉降层顶部10cm以内。
1.2.3分离极性组分和非极性组分的洗脱体积的研究取多个干净的250mL烧瓶先在烘箱内烘干并在干燥器内冷却至恒重,然后分别用分析天平称重,记为m0。用移液管准确移取20mL样品溶液(1.2.1)加入层析柱(1.2.2)内,然后从层析柱上部加入一定体积的洗脱剂,打开玻璃层析柱下端的活塞阀门,通过人工对活塞阀门的调节,控制以2mL/min左右的流速放出层析柱内洗脱剂,进行非极性组分的洗脱,同时在层析柱下端放一个干净的25mL量筒,以收集流出的洗脱剂,一旦收集的洗脱剂达到25mL,立刻关闭层析柱的活塞阀门,将此量筒中收集的洗脱剂全部转移入一个已恒重的250mL烧瓶,为非极性组分1号收集馏分;再用另一个干净的25mL量筒,用同样的方法和条件,继续对层析柱内油脂样品的非极性组分进行洗脱和收集,同样当收集的洗脱剂达到25mL时,暂停洗脱,将量筒内收集的洗脱剂全部转移入另一个已恒重的250mL烧瓶,为非极性组分2号收集馏分,如此重复操作,
