层析硅胶应注意的操作问题有哪些

层析硅胶应注意的操作问题有哪些

一般柱层析硅胶应该注意哪些操作问题?让我们一起学习。
一、装柱:

柱头下方的活塞杆一定不能涂润滑液,会被渗滤剂送到商品中,可以选择四氟节门。干式和湿式装柱没有区别,只需要装柱头即可。安装的柱头应适当紧密(过密的渗滤剂走得很慢),必须匀称(否则试品会从一侧倾斜)。书中写的都是看不见的气泡。我觉得大多数情况下,有些气泡危害不大,一充气泡就全出来了。当然,如果你安装的柱头上总是有小气泡,说明你需要更多的训练。但柱头更忌讳的是裂开,无论是竖的还是横的,都会危害分离的实际效果,甚至废止!

柱层析硅胶

二、加样:
用少量有机溶剂溶剂加样,加满后打开下面的活塞杆。当有机溶剂层降低到应时沙面时,加入少量低极性溶剂,然后打开活塞杆。这样两三次,应时沙基本都是灰白色的。加入渗滤剂,一开始不需要充压,等溶试品的有机溶剂与试品层有一定距离(2~4cm即可),再充压,避免有机溶剂(如二氯甲烷等)带入试品迅速下滑。
三、渗滤剂的选择:
感觉rf0.2~0.3上下所需点比较好。不要以为在板子上爬得很高,过柱头就用那种旋光性,假如rf在0.6,即使相距0.2也很难在柱头上分离,因为柱头是几次爬板的情况,可以根据公式计算出比较:0.6/0.8一次的分离度,无疑比不上(0.2/0.3)的三次方或四次方大。
四、收集试品:

用硅橡胶固定柱子的基本原理是吸附和分析的平衡。所以如果试品和硅橡胶的吸附比较强,就不容易排出。这样就会产生,后面的点先出,前面的点完。此时可选择三氧化二铝作固定不动相。另外,收集到的试管婴儿的尺寸要根据试产量来确定,特别是少量的试产品,如果用大试管婴儿,很有可能一个就收到三个试产品,wuwu。如果都用小试管婴儿,劳动量很大。

柱层析硅胶

5.解决办法:
柱分后的商品,由于使用了大量的有机溶剂,其中的杂物也会积累在商品中,所以如果要送剖析,用少量的有机溶剂清洗一下,因为绝大多数的残渣都是溶解在有机溶剂中的,一洗基本上就没了,必要时进行重结晶。
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