柱层析硅胶的操作方法及注意事项

色谱法利用吸附原理，即利用柱层析硅胶对中药合剂中各种成分的吸附能力的差异，将合剂中的成分分离出来。柱硅胶通过漏斗不中断地安装在柱中，形成细流，慢慢加入管道。柱硅胶也可以用橡胶锤轻轻敲击，使硅胶填料连续、均匀、紧密。柱装满后，打开活塞下端，倒入洗涤剂洗掉，排出柱内空气，保持一定的液位。

将开始使用的淋浴液放入色谱柱中，打开下活塞，让淋浴液慢慢流出。然后将柱层析硅胶慢慢连续地倒入柱中（或将硅胶悬浮液和适量的洗脱液慢慢地加入柱中）。硅胶受重力驱动，洗脱液在柱中自由沉降。在此期间，流出的液体应不断地加入到柱中，以保持一定的液位，直到加入硅胶，柱中的沉降不会改变。然后在硅胶上加入一小块滤纸或一点脱脂棉。根据添加的样品量，将洗脱液的液位控制在一定高度。

将待分离的样品溶解在少量用于装柱的洗脱液中，制成小体积、高浓度的样品溶液，并在柱层析硅胶的柱层中加入硅胶表面。如果样品不溶于色谱柱装柱所用的洗脱液，将样品溶解在挥发性溶剂中，加入适量硅胶(不超过色谱柱中硅胶总量的1/10)，用它充分混合去除溶剂。将装有样品的硅胶均匀加入柱顶(始终保持淋洗液在一定水平)，然后覆盖一层硅胶。注意沿柱内壁慢慢加入样品，始终保持柱层硅胶上表面光滑；样品量为硅胶的1/60~1/30。