柱层析硅胶实际应用综述
层析是一种以分配平衡机制为基础的色谱体系，它由两相组成，一个是固定相，一个是流动相。在两相相对运动过程中，多次利用混合物中所含组分分配平衡特性的差异，最终实现相互分离。这是一种提纯和分离有机或无机物质的方法。
色谱法根据固定相的状态可以分为柱色谱、平板色谱和棒色谱三种，其中实验室和实际使用最为普遍的是柱层析硅胶和薄层硅胶板，以及它们之间的配合应用。
圆柱层析硅胶
一、吸收色谱的原则。
硅胶与被分离物质在一定条件下发生作用，这种作用主要是物理作用和化学作用，这两种物理作用是硅胶表层与溶质分子之间的范德华力所产生的，化学作用主要是硅胶表层上的羟基与被分离物质之间的氢键作用。
二是硅胶柱层析技术的实际应用。
以下是以实验室为例的具体操作步骤：
2.1硅胶制备。
为200-300目等规格提供一定数量的柱层析硅胶。
2.准备实验仪器。
一个玻璃色谱柱，一个铁制台子，烧杯，锥形瓶，直径较大的玻璃漏斗，一个玻璃棒。
2.3安装柱
2.3.1添加柱层析硅胶。
该方法分为干法和湿法，具体操作方法如下。
②干燥法：将硅胶一次性加入色谱柱，振荡管壁使其均匀下沉，然后沿着管壁缓慢加入用于开始层析的流动相，或将色谱柱下端出口加入活塞，加入适量流动相，旋开活塞使流动相慢慢滴出，然后自管顶缓慢加入硅胶，使其均匀润湿下沉，在管内形成松紧适中的吸附层。在运行期间，硅胶表面应保持有足够的流动相。
②湿法：硅胶与流动相混合，搅拌去除气泡，徐徐倾入色谱柱，然后加入流动相，洗净附着在管壁上的吸附剂，使色谱柱表面平整。填充硅胶所用的流动相由色谱柱自然流下，液面将柱面相固定，即加试样溶液。
2.3.2上样。
在层析过程中，将样品溶于流动相，然后沿着色谱柱缓慢加入。小心，不要把硅胶翻过来。或者把样品溶解在合适的溶剂里。将少量的硅胶混合，然后将溶剂挥发掉，使其呈松散状；将混合过的硅胶样品加入到制备的色谱柱上。如果样品不能在普通溶剂中溶解，可以将其与适量的硅胶在乳钵中研磨混合后加入。
2.4洗脱和收集
除非另有规定，一般按流动相洗脱容量的大小，对流动相的品种和比例进行递增变换，分块收集流出液体，直至流出液体中所含成分明显减少或不再含有时，再对流动相的品种和比例进行调整。在运行期间，硅胶表面应保持有足够的流动相。
5样本分离后检测。
2.5.1初步检验。
洗净的溶剂流出一定量后，可对流出液进行初步检测，并将锥形瓶换成小试管收集.一般只进行初步快速检测，因此通常是先取薄层板，用铅笔和直尺将硅胶板分划成若干小方块，按一定的顺序编号，取一根直径约0.3mm的玻璃毛细管蘸取少量的流出液，点在薄层板的一个小格子里，待半点干后，再用物理或化学方法检测。
2.5.2正式测试。
②点样法：取各分部收集的冲洗液分别直接点样法，若冲洗液太稀、浓度过小，可先浓缩.点样器一般采用玻璃毛细管，点样点的直径一般在3-5mm左右。
B展开：一般在展开槽内进行，展开方式通常选择向上展开。
③展开剂：实际使用的冲洗液。
④显色：如一般的物理测试和化学测试一样。在物理检测方法中，首先采用紫外法，紫外法通常采用两种波长(254nm和365nm)，其次采用碘蒸气显色法。在化学检测方法中，通常直接使用显色剂进行喷雾，显色剂有一般显色剂和专用显色剂，一般显色剂最常用的是硫酸-乙醇或甲醇(1:1)溶液，在喷雾后，一些化合物立即发生反应，但是大多数化合物在经过几分钟的加热后才发生显色，不同化合物的反应不同，所以颜色也往往不一样。专门性显色剂是指对某种或某种化合物显色的试剂，它利用该化合物自身的特性，或通过该化合物所含某些官能团的特殊反应展开后，根据色斑可粗略估计待分离物的含量。
2.合并处理。
基于以上所测得的结果，我们可以将具有相同Rf值的部分合并，然后用旋转蒸发器使合并部分旋转蒸发，最后得到我们所需的目标产品。
2.7色谱柱清洗。
大多数情况下，色谱柱中的硅胶都是一次性使用，但是使用后的色谱柱由于还含有冲洗溶剂，所以要将内部的硅胶排出比较困难，排出硅胶的方法之一是将柱管放入一定时间，让溶剂自然挥发后，将硅胶排出。但是这样既浪费时间又污染环境。其次，使用比色谱柱稍长的木棒或塑料棒可将含有溶剂的硅胶一段一段地拿出来，但是这种方法也比较麻烦。方法三是采用普通真空泵，通过色谱柱中的剩余溶剂进行减压抽提，在色谱柱与真空泵之间加入冷阱，这样抽提的溶剂可以有效地收集，且不污染环境，同时色谱柱中的硅胶可以快速干燥，便于硅胶抽提。
