柱层析硅胶使用注意事项
一.硅胶原理
采用吸附原理，即利用硅胶对中药合剂中各种成分的吸附能力差异，对合剂中的成分进行分离。
二.柱层析硅胶的操作方法和注意事项
1.色谱柱填充
操作要点：装柱前，应在柱底垫一层脱脂棉，防止吸附剂外泄。
干包装和湿包装有两种方法
（1）干装：通过漏斗不间断地将柱层分析硅胶放入柱中，形成细流，慢慢加入管道。柱层分析硅胶也可以用橡胶锤轻轻敲击，使硅胶填料连续均匀、紧密。柱子装满后，打开活塞下端，然后倒入淋浴液进行清洗，排出柱内空气，保持一定液位。
（2）湿填料：将开始使用的洗涤液放入色谱柱中，打开活塞，让洗涤液慢慢流出。然后将硅胶缓慢连续地倒入柱中（或将硅胶悬浮液和适当的清洗液缓慢地加入柱中）。硅胶受重力驱动，清洗液在柱中自由沉降。在此期间，应不断向柱中添加流出的液体淋浴液，以保持一定的液位，直到添加硅胶，柱中的沉降不会改变。然后在硅胶上加入一小块滤纸或一点脱脂棉。根据添加的样品量，将洗涤液的液位控制在一定高度。
2.上样
将待分离的样品溶解在少量用于立柱的洗脱液中，制成小体积.对于高浓度的样品溶液，在色谱柱的柱层上添加硅胶表面。如果样品不溶于色谱柱装置中使用的洗脱液，将样品溶解在挥发性溶剂中，加入适量硅胶（不超过色谱柱中硅胶总量的1/10），并与其完全混合以去除溶剂。将装有样品的硅胶均匀地加入柱顶（始终将洗涤液保持在一定水平），然后覆盖一层硅胶。上样时，注意沿柱内壁缓慢添加，始终保持柱层分析硅胶上表面平整；样品量为硅胶的1/60~1/30。
3.洗脱
通过薄层色谱法可以选择洗脱液。一般来说，TLC显影时Rf值为0.2～0.3的溶剂系统是一个很好的洗脱系统，采用梯度洗脱进行洗脱。
首先，打开色谱柱下端的活塞，将洗脱液的流速保持在1~2滴/秒。连续向上端添加洗脱液（加入速度可由分裂漏斗控制，接近下端流速）。如果单个溶剂的洗脱效果不好，可以用混合溶剂（通常不超过三种溶剂）清洗，通常是梯度洗脱。洗脱液的洗脱能力由弱到强逐渐增强。
4.采集处理
收集洗脱液的等分试样，大约等于使用的二氧化硅量。通过薄层对每个洗脱液进行定性检查，并结合含有相同成分的洗脱液。通常可以通过浓缩和再结晶获得一定的单体成分。如果它仍然是几种单体成分的混合物，那么单体成分的结晶就不容易沉淀。需要进一步的色谱法或其他方法。
