柱层析硅胶操作方法
一.柱层析硅胶原理
色谱法利用吸附原理，即利用硅胶对中药合剂中各种成分吸附能力的差异，将合剂中的成分分离出来。
二.
柱层析硅胶的操作方法及注意事项
1.色谱柱填充
操作要点：装柱前，应在柱底垫一层脱脂棉，防止吸附剂泄漏。
有两种方法：干包装和湿包装
（1）干安装：柱硅胶通过漏斗不中断地安装在柱中，形成细流，慢慢加入管道。柱硅胶也可以用橡胶锤轻轻敲击，使硅胶填料连续、均匀、紧密。柱装满后，打开活塞下端，倒入洗涤剂洗掉，排出柱内空气，保持一定液位。
（2）湿填料：将开始使用的淋浴液放入色谱柱中，打开下活塞，让淋浴液慢慢流出。然后将硅胶慢慢连续地倒入柱中（或将硅胶悬浮液和适量的洗脱液慢慢地加入柱中）。硅胶受重力驱动，洗脱液在柱中自由沉降。在此期间，流出的液体应不断地加入到柱中，以保持一定的液位，直到加入硅胶，柱中的沉降不会改变。然后在硅胶上加入一小块滤纸或一点脱脂棉。根据添加的样品量，将洗脱液的液位控制在一定高度。
2.上样
将待分离的样品溶解在少量用于装柱的洗脱液中，制成小体积.高浓度样品溶液，加入色谱柱的柱层硅胶表面。如果样品不溶于色谱柱装柱所用的洗脱液，将样品溶解在挥发性溶剂中，加入适量硅胶(不超过色谱柱中硅胶总量的1/10)，用它充分混合去除溶剂。将装有样品的硅胶均匀加入柱顶(始终保持淋洗液在一定水平)，然后覆盖一层硅胶。注意沿柱内壁慢慢加入样品，始终保持柱层硅胶上表面光滑；样品量为硅胶的1/60~1/30。
3.洗脱
通过薄层色谱法选择洗脱液。一般来说TLC显影时Rf值为0.2～0.溶剂系统为良好的洗脱系统，采用梯度洗脱。
首先，打开色谱柱下端的活塞，使洗脱液的流速保持在1~2滴/秒。在上端连续添加洗脱液（可使用分液漏斗控制加入速度与下端相似）。如果单一溶剂的洗脱效果不好，可以用混合溶剂（一般不超过三种溶剂）进行洗脱，通常采用梯度洗脱。洗脱液的洗脱能力从弱到强逐渐增加。
4.采集处理
用等于二氧化硅含量的等分试样收集洗脱液。通过薄层定性检查每种洗脱液，并将含有相同成分的洗脱液结合起来。一定的单一成分通常可以通过浓缩和重结晶来获得。如果它仍然是几种单一成分的混合物，单一成分的结晶就不容易沉淀。需要进一步的色谱或通过其他方法进行分离。
