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使用柱层层析硅胶时的几个技巧


    柱层层析硅胶制造商小编带您了解相关知识:硅胶分析的分离原理是根据硅胶上物质的吸附力,一般大物质容易被硅胶吸附,弱物质不易被硅胶吸附,整个分析过程是吸附.解吸.再吸附.再解吸过程。离子交流层析、凝胶过滤层析和亲和层析是三种分离混合物的经典层析技术。
    使用柱层层析硅胶时的几个技巧:
1.硅胶的应用

    刚开始做柱层分析的时候,很容易把柱子安装得又长又短,有时候还会有很多硅胶残留浪费硅胶,主要是因为没有掌握硅胶等固定相的使用量。柱层分析中使用的硅胶一般为100-200目,100毫升硅胶质量约为47克。如果安装直径2.8厘米的柱子,可以安装高度18厘米。

2.使用洗脱剂
    洗脱剂可通过薄层分析确定,一般通过待分离样品确定Rf值为0.2-0.3.选择的洗脱剂应使两种相邻物质Rf价值差异很大化。不要认为在板上爬高分离效果更好,如果假设在板上爬高分离效果更好,Rf在0.6.即使相差为0.2,也不容易在柱上分离。柱分析硅胶制造商认为,由于柱是一个反复爬行的过程,可以通过公式进行比较:0.6/0.8次分离,肯定不如(0.2/0.3)三次方或四次方大。
    乙酸乙酯:石油醚系统;甲醇:氯仿系统;甲醇:水:正丁醇:醋酸系统;尾部可加入少量氨或冰醋酸。对于难以分离的化合物,一是增加柱的长度和直径,二是降低洗脱剂的性能,使混合物分离良好。
3.柱层硅胶柱分析技巧
    柱层分析的装柱非常重要,装柱的效果会直接影响分层分析的分离效果。有两种方法:湿柱和干柱。湿柱非常简单,应用广泛,即先用比固定剂多两倍的洗脱剂将固定相活成均匀浆,先用脱脂棉塞住柱底,再倒入洗脱剂将脱脂棉中的气泡赶出。
处理方法为:(1)固定相必须增强;(2)必须使用更多的溶剂“走柱子”。