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柱层析硅胶的操作方法及注意事项


    色谱法利用吸附原理,即利用柱层析硅胶对中药合剂中各种成分的吸附能力的差异,将合剂中的成分分离出来。柱硅胶通过漏斗不中断地安装在柱中,形成细流,慢慢加入管道。柱硅胶也可以用橡胶锤轻轻敲击,使硅胶填料连续、均匀、紧密。柱装满后,打开活塞下端,倒入洗涤剂洗掉,排出柱内空气,保持一定的液位。

柱层析硅胶
   将开始使用的淋浴液放入色谱柱中,打开下活塞,让淋浴液慢慢流出。然后将柱层析硅胶慢慢连续地倒入柱中(或将硅胶悬浮液和适量的洗脱液慢慢地加入柱中)。硅胶受重力驱动,洗脱液在柱中自由沉降。在此期间,流出的液体应不断地加入到柱中,以保持一定的液位,直到加入硅胶,柱中的沉降不会改变。然后在硅胶上加入一小块滤纸或一点脱脂棉。根据添加的样品量,将洗脱液的液位控制在一定高度。
柱层析硅胶
   将待分离的样品溶解在少量用于装柱的洗脱液中,制成小体积、高浓度的样品溶液,并在柱层析硅胶的柱层中加入硅胶表面。如果样品不溶于色谱柱装柱所用的洗脱液,将样品溶解在挥发性溶剂中,加入适量硅胶(不超过色谱柱中硅胶总量的1/10),用它充分混合去除溶剂。将装有样品的硅胶均匀加入柱顶(始终保持淋洗液在一定水平),然后覆盖一层硅胶。注意沿柱内壁慢慢加入样品,始终保持柱层硅胶上表面光滑;样品量为硅胶的1/60~1/30。