浅析柱层析硅胶产品运用技巧有哪些

浅析柱层析硅胶产品运用技巧有哪些

发布日期:2021-03-22 10:02:38

硅胶层分析的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力而分离的。一般来说,较大的物质容易被硅胶吸附,较弱的物质不容易被硅胶吸附。整个层分析过程是吸附、解吸、再吸附和再解吸过程。根据填充基质和样品分配的交流原理,离子交流层分析、凝胶过滤层分析和亲和层分析是三种分离混合物的经典层分析技巧。

柱层析硅胶

使用柱层析硅胶的一些技巧:
一是硅胶的使用。
刚开始做柱层析很容易将柱子装长或短,有时还会有大量的硅胶残留,破坏硅胶,这主要是因为对硅胶等固定相的使用量没有把握。柱层析用硅胶一般为100-200目,100毫升硅胶质量约为47克,如果安装直径为2.8厘米的柱子,则可安装18厘米高。
二是使用洗脱剂。
洗涤剂可以通过薄层分析来确定,一般来说,待分离样品的Rf值应为0.2-0.3。选择的洗涤剂应使两相邻物质的Rf值差异最大化。不要认为在板上爬高分离效果更好。如果Rf在0.6,即使相差0.2,也不容易在柱子上分离。柱层析硅胶制造商认为,由于柱子是一个多次爬板的过程,可以通过公式比较:0.6/0.8分离度,肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方大。

常用的展开剂性小的乙酸乙酯:石油醚系统;甲醇:氯仿系统;甲醇:水:正丁醇:醋酸系统;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸。对于难以分离的化合物,一是增加柱子的长度和直径,二是降低洗脱剂的性能,使混合物分离良好。

柱层析硅胶

柱层析硅胶装柱技巧。
柱分析的柱子非常重要,柱子的效果直接影响分析的分离效果。有湿法柱和干法柱等两种方法。湿法柱简单,运用也普遍,首先用比固定相多两倍的洗涤剂将固定相活化为均匀的浆料,柱底用脱脂棉塞住,然后放入洗涤剂将脱脂棉中的气泡排出。
处理方法是:(1)固定相必须增强;(2)必须使用更多的溶剂走柱子。
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