柱层析硅胶的操作方法及注意事项
发布日期：2022-03-30 08:37:41
利用吸附原理，即利用柱层析硅胶对中药混合物中各种成分吸附能力的差异，使混合物中各种成分分离的色谱法。操作要点:装柱前，柱底应垫一层脱脂棉，防止吸附剂泄漏。有两种方法:干装柱和湿装柱。
（1）干装柱：柱层析硅胶通过漏斗装入柱内，中间不间断，形成细流，慢慢加入管内。也可以用橡胶锤轻轻敲打柱层析硅胶，使柱层析硅胶填充连续、均匀、紧密。柱安装后，打开下活塞，然后倒入洗脱剂清洗柱内空气，保持一定的液位。
（2）湿装柱：将原洗脱剂放入柱中，打开下活塞，使洗脱剂缓慢流出。然后将柱层析硅胶慢慢连续地倒入柱中（或将柱层析硅胶与适量洗脱剂混合，慢慢加入柱中）。柱层析硅胶依靠重力和洗脱剂的驱动，在柱中自由沉降。在此期间，应不断将流出的洗脱剂加回柱中，保持一定的液位，直至柱层析硅胶加入柱中，沉降不再改变。然后在柱层析硅胶上加入一小块滤纸或一些脱脂棉。根据样品量，将洗脱剂的液位控制到一定高度。
均匀浆法:搅拌均匀浆，加入柱层析硅胶体积翻倍的溶剂，用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮系统，则用石油醚混合；如果洗脱剂是氯仿/醇系统，则用氯仿混合。如果不能搅拌均匀浆，说明溶剂中含水量过高，尤其是乙酸乙酯/丙酮。如果色谱不与水配伍，必须提前用无水硫酸钠长期干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以去除1%的醇。如果样品对酸敏感，则不能通过氯仿系统。
