柱层析硅胶使用注意事项

柱层析硅胶使用注意事项

发布日期:2022-11-29 14:11:28

一.硅胶原理
    采用吸附原理,即利用硅胶对中药合剂中各种成分的吸附能力差异,对合剂中的成分进行分离。
二.柱层析硅胶的操作方法和注意事项
1.色谱柱填充
    操作要点:装柱前,应在柱底垫一层脱脂棉,防止吸附剂外泄。
干包装和湿包装有两种方法
(1)干装:通过漏斗不间断地将柱层分析硅胶放入柱中,形成细流,慢慢加入管道。柱层分析硅胶也可以用橡胶锤轻轻敲击,使硅胶填料连续均匀、紧密。柱子装满后,打开活塞下端,然后倒入淋浴液进行清洗,排出柱内空气,保持一定液位。

(2)湿填料:将开始使用的洗涤液放入色谱柱中,打开活塞,让洗涤液慢慢流出。然后将硅胶缓慢连续地倒入柱中(或将硅胶悬浮液和适当的清洗液缓慢地加入柱中)。硅胶受重力驱动,清洗液在柱中自由沉降。在此期间,应不断向柱中添加流出的液体淋浴液,以保持一定的液位,直到添加硅胶,柱中的沉降不会改变。然后在硅胶上加入一小块滤纸或一点脱脂棉。根据添加的样品量,将洗涤液的液位控制在一定高度。

2.上样
    将待分离的样品溶解在少量用于立柱的洗脱液中,制成小体积.对于高浓度的样品溶液,在色谱柱的柱层上添加硅胶表面。如果样品不溶于色谱柱装置中使用的洗脱液,将样品溶解在挥发性溶剂中,加入适量硅胶(不超过色谱柱中硅胶总量的1/10),并与其完全混合以去除溶剂。将装有样品的硅胶均匀地加入柱顶(始终将洗涤液保持在一定水平),然后覆盖一层硅胶。上样时,注意沿柱内壁缓慢添加,始终保持柱层分析硅胶上表面平整;样品量为硅胶的1/60~1/30。
3.洗脱
    通过薄层色谱法可以选择洗脱液。一般来说,TLC显影时Rf值为0.2~0.3的溶剂系统是一个很好的洗脱系统,采用梯度洗脱进行洗脱。
    首先,打开色谱柱下端的活塞,将洗脱液的流速保持在1~2滴/秒。连续向上端添加洗脱液(加入速度可由分裂漏斗控制,接近下端流速)。如果单个溶剂的洗脱效果不好,可以用混合溶剂(通常不超过三种溶剂)清洗,通常是梯度洗脱。洗脱液的洗脱能力由弱到强逐渐增强。
4.采集处理
    收集洗脱液的等分试样,大约等于使用的二氧化硅量。通过薄层对每个洗脱液进行定性检查,并结合含有相同成分的洗脱液。通常可以通过浓缩和再结晶获得一定的单体成分。如果它仍然是几种单体成分的混合物,那么单体成分的结晶就不容易沉淀。需要进一步的色谱法或其他方法。
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