柱层析硅胶的操作方法

柱层析硅胶的操作方法

1.柱层分析硅胶装柱

    柱柱层析硅胶操作关键装柱前，柱底应垫一层脱脂棉，防止吸附剂泄漏。有两种方法:干装柱和湿装柱。
(1)干装柱:将硅胶通过漏斗放入柱内，中心不应连接，形成细流逐渐参与管内。也可以用橡胶锤悄悄击打柱子，使硅胶柱填充均匀.严格。柱子安装好后，打开下活塞，然后倒入洗脱剂洗掉，排出柱子内的空气，坚持一定的液位。

2）柱分析硅胶湿装柱：将准备好使用的洗脱剂放入柱中，打开下活塞，使洗脱剂缓慢流出。然后逐渐将硅胶连续倒入柱（或将硅胶和适量洗脱剂混合成悬浮液，逐渐参与柱），硅胶依靠重力和洗脱剂驱动，在柱内自由沉降，不断将洗脱剂加回柱内，坚持一定的液位，直至硅胶加入柱内沉降不再变化。然后在硅胶上加入一小块滤纸或少量脱脂棉。根据样品量将洗脱剂的液位控制到一定的高度。

    柱分析硅胶均匀浆法:搅拌均匀浆。参与干硅胶体积翻倍的溶剂，用玻璃棒充分混合。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮系统，则用石油醚混合；如果洗脱剂是氯仿/醇系统，则用氯仿混合。如果不能搅拌均匀浆，说明溶剂中含水量过高，尤其是乙酸乙酯/丙酮。如果色谱不与水配伍，就要提前用无水硫酸钠长期使用。氯仿用无水氯化钙去除1%的醇是无聊的。如果样品对酸敏感，就不能用氯仿系统过柱。
2.柱层分析硅胶上样
    将要分离的样品溶解在少数装柱时使用的洗脱剂中，制成小体积.高浓度样品溶液参与分析柱中硅胶表面。如果样品不溶于装柱时使用的洗脱剂，则样品溶于挥发性溶剂，并参与适量硅胶（不超过柱中硅胶总量的1/10）与之混合。除去溶剂外，将混合样品的硅胶均匀加入柱顶（始终坚持洗脱剂有一定的液位），然后覆盖一层硅胶。注意沿柱内壁逐渐参与样品，始终坚持硅胶上端平整；样品量为硅胶的1/60~1/30。
3.洗脱
    洗脱剂的选择可以通过薄层色谱筛选，一般可以通过薄层色谱筛选。TLC打开时Rf值为0.2~0.3的溶剂系统是很好的洗脱系统，采用梯度洗脱法洗脱。首先打开柱下活塞，保持洗脱剂流速1~2滴/秒。上端不断增加洗脱剂(可用分液漏斗控制，增加速度接近下端流出速度)。如果单个溶剂的洗脱效果不好，可以用混合溶剂(一般不超过三种溶剂)洗脱，一般采用梯度洗脱。洗脱剂的洗脱能力由弱到强逐渐增加。
4.收集和处理等份收集洗脱液，每次收集的量与使用的硅胶的量大致相同。每种洗脱液由薄层定性检查，并与含有相同成分的洗脱液结合。.重结晶处理通常可以得到一个单一的成分。如果混合物仍然是几成分的混合物，则不容易分离单一成分的结晶。需要进一步分析或用其他方法分离。